小鼠免疫球蛋白M(IgM)Elisa试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用

检测范围：96T

0.1ng/ml - 4ng/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白M(IgM)含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠免疫球蛋白M(IgM)水平。用纯化的小鼠免疫球蛋白M(IgM)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白M(IgM)，再与HRP 标记的免疫球蛋白M(IgM)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M(IgM)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白M(IgM)浓度。

试剂盒组成：

1、30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2、酶标试剂6ml×1瓶8标准品(8ng/ml)0.5ml×1瓶

3、酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

4、样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5、显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6、显色剂B液6ml×1瓶12密封袋1个

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤：

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

4ng/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

2ng/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

1ng/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

0.5ng/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

0.25ng/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期：

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6 个月