在ELISA试剂盒中双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下：
    1.将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
    2.加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
    3.加海标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与纭本中受检抗原的量相关。
    4.加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色物。通过比色，测知标本由抗原的量。
    在临床检验中，此法适用于检测各种蛋白质等大分子抗原，例如HbsAg、HbaAg、AFP、HCG等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和海标用
的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很髙的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应。

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