牛肿瘤坏死因子α ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法：

　　1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

　　3、细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

　　5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。

　　牛肿瘤坏死因子αELISA试剂盒标本要求：

　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。类风湿关节炎若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，强直性脊柱炎的锻炼但应避免反复冻融

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　牛肿瘤坏死因子αELISA试剂盒性能：

　　1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0. 990。

　　2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

　　3. 重复性：板内、肿瘤坏死因子板间变异系数均小于10%。类风湿性关节炎治疗

　　牛肿瘤坏死因子αELISA试剂盒操作步骤：

　　1. 使用前，类风湿性关节炎治疗将所有试剂充分混匀www.yisaipu.com。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

　　2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、儿童类风湿性关节炎加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板www.yisaipu.com，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

　　4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

　　8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。