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人增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒使用说明书
编辑:       时间: 2012-12-28       http:// www.xinlebio.com

人增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒使用说明书

检测原理:试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被PCNA抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗原,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的增殖细胞核抗原抗体(PCNA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法
1. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
2. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品
1. 37℃恒温箱
2. 酶标仪(450nm)
3. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5 倍,最终结果乘以5 才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

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