elisa试剂盒检测说明

1、试剂

(1)5%与2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制；

(2)牛血清白蛋白(BSA)缓冲液：用0.05mol/LpH7.4PBS配制。含0.01mol/LEDTA、0.1%硫柳汞、0.05%Tween20及4%BSA；

(3)HRP-SPA用改良过碘酸钠法将SPA与辣根过氧化物酶(HRP)制成结合物，最适工作浓度以方阵法滴定；

(4)热聚合人IgG：人IgG10mg/ml，63℃加热20min制成。

2、把持步伐

(1)用PBS稀释SPA成5Ps/ml，包被聚苯乙烯反应板微孔，每孔0.1ml( 比力孔不包被)，置4℃ 过夜后洗涤3次备用；

(2)待测血清0.05ml加PBS0.15ml和5%PEG0.2ml混匀，4℃ 过夜后1600r/min离心20min，弃上清，沉淀用2.5%PEG洗2次，加入PBS0.2ml和BSA缓冲液0.2ml，混匀，置37℃水浴30min，摆荡，使彻底溶解；

(3)将已溶解的待测血清沉淀物加至上述包被孔和比力孔中，置37℃60min，洗3次；各孔加底物溶液(OPD—H202)0.1ml，37℃20min使呈色。每孔加2mol/LH2S041滴终止反应。置酶标仪492nm测各孔吸光值；

(4) 标准曲线制备：取正常人血清0.2ml，加热聚合人IsC(120ug/ml)0.2ml，再加PBS0.4ml和5%PEG0.8ml，置4℃ 过夜。同时做不加热聚合人耽的正常血清比力，以排除血清中干扰因素。沉淀清洗同标本把持。用稀释的BSA缓冲液(加等量0.01mol/LpH7.4PBS)1.6ml溶解并稀释成120、60、30、15、7.5ug/ml，与待测血清同法把持，制成工作标准曲线；

(5)结果判断：从待测血清吸光度值查标准曲线，即可换算成相当于热聚合人IgG的CIC含量(ug/ml)。以高于正常比力X+2S，即大于28.4ug/ml为阳性。

3、注意事项

(1)热聚合人IgC应分装贮存于-20℃，不宜反复冻融，否则易解聚；

(2)PEG的浓度影响CIC沉淀量，须严格配制。